产品货号:
GS4772
中文名称:
细菌总蛋白提取试剂盒
英文名称:
Bacterial Protein Extraction Kit
产品规格:
10T|50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用温和的离子型去污剂裂解提取,无需超声或反复冻融;加入兼容的蛋白酶抑制剂尽量保证蛋白质的完整性;提取的蛋白质可以用于后续FLAG、poly-His和GST标签蛋白的亲和纯化,也可以兼容许多蛋白的生化测定实验。
- 操作简单快捷;
- 不需要特殊的仪器设备;
- 可以储存很长的时间。
可用于在1~5L细菌培养液中提取总蛋白。
组分 | 10T | 50T | 保存 |
10×Cell Lysis Buffer | 5mL | 25mL | 室温 |
DNase/RNase | 200μL | 1mL | -20℃ |
Lysozyme | 1mL | 5mL | |
PMSF | 500μL | 2.5mL | |
2×SDS Gel-Loading Buffer | 0.2mL | 1mL |
保存:-20℃,有效期2年。
- 可加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解,但使用Ni2+亲和柱纯化时不能添加EDTA或其他螯合剂,因为螯合剂会破坏Ni柱与组氨酸标签的结合。
- 提取后的蛋白上清液可能需要通过0.45μm的过滤器,以防止后续纯化过程中树脂堵塞。
- 该试剂盒适用于革兰氏阴性菌和阳性菌。
- 如果是裂解效果对特定菌株裂解效果不好,可以将第三步37℃孵育时间延长至1h,再通过超声破碎来破碎菌体,但是在超声处理过程中需要全程保持低温,超声破碎功率300 W、10 Sec超声10 Sec间隔直至菌液变澄清。
- 对于提取的蛋白质,可以采用我公司生产的BCA蛋白定量检测试剂盒(货号:GS1480)或抗干扰型蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1485)对提取样品中的蛋白质进行定量。
- 建议在进行蛋白提取后尽快使用提取的蛋白质,防止后续因人为原因造成降解。
- 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算,为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能,将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
- 使用后请旋紧瓶盖,防止溶液挥发与空气中的物质发生化学反应。
- 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果概不承担责任。
- 先取0.5mL的10×Cell Lysis Buffer用去离子水稀释成5mL的1×Cell Lysis Buffer。
- 8000rpm(5700g)离心10min来收集表达目的蛋白的宿主菌,弃掉上清并用1×PBS缓冲液冲洗沉淀,将细菌沉淀每100mL菌体培养物(OD600 = 1时)重悬于4mL的1×Cell Lysis Buffer中。
- 向1×Cell Lysis Buffer中加入40μL的PMSF和80μL的Lysozyme,37℃孵育细菌悬浮液30min。
- 将混合物放在摇床上孵育10min。
- 加入20μL的DNase/RNase,37℃下继续在摇床上孵育10min。
- 转置冷冻离心机4℃下5000rpm(3000g)离心30min,去除沉淀不溶物,将蛋白上清液收集到干净的试管中。
- 各取10μL的2×SDS Gel-Loading Buffer与10μL的蛋白上清液混合煮沸,通过10%浓度的SDS-PAGE电泳实验,上样量20μL来分析提取物。将含有目的蛋白的组分保存在-80℃或直接通过纯化柱纯化。
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